北纳生物-河南省工业微生物菌种工程技术研究中心

免疫细胞化学技术观察DMT1在BeWo细胞中的表达定位

小雪-会员头像-www.bncc.org.cn北纳生物网 小雪 0 26 2021-09-14
【摘要】进一步确定二价金属离子转运体1(DMT1)在人胎盘绒毛膜癌细胞(BeWo)中的表达定位,以及缺铁状态下mRNA的表达变化。方法采用免疫细胞化学技术观察DMT1在BeWo细胞中的表达定位,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测DMT1在BeWo细胞缺铁状态下mRNA的表达变化。结果DMT1在BeWo细胞中呈阳性表达.其弥漫性表达定位于细胞质和细胞膜上;DMT1+IREmRNA和DMT1-IREmRNA的相对表达量随缺铁干预浓度和时间的增加而上调.DMT1+IREmRNA的相对表达量高于DMT1-IREmRNA。结论DMT1大量表达在BeWo细胞质和细胞膜上,且表达受机体不同铁水平的调节,说明其在胎盘铁转运过程中发挥重要作用,为进--步探讨胎盘铁转运分子机制提供实验基础。
  • 胎儿所有铁来自母体供给,母体通过胎盘向胎儿进行单向的、 主动的铁转运。 铁转运过程分为铁吸收、铁转运及铁输出 3 个阶段。细胞内铁转运过程即
    被还原酶还原的 Fe2+ 从内吞小体内转运入胞浆,以 及 Fe2+ 在细胞内储存利用的过程。二价金属离子转运体 1( divalent metal transporter 1,DMT1) 是一 种 广泛表达的膜铁转运蛋白,其在细胞内铁转运过程中具有重要作用。目前其在胎盘的表达仍未定义清楚。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与器材

    1.2 免疫细胞化学染色

    1.3 DFO 缺铁干预

    2 结果 

    2.1 DMT1 在 BeWo 细胞的表达定位

    2.2 缺铁状态下BeWo细胞DMT1 mRNA的表达变化

    本实验观察到DMT1弥漫性地表达于BeNo细胞,阳性反应物在BeVWo细胞均匀着色,表明DMT1表达于BeWo细胞质和细胞膜上,揭示胎盘DMT1在母体向胎儿铁转运机制中的作用。DMT1广泛表达在哺乳类动物的各个组织,2种亚型具有组织细胞分布特异性及亚细胞特异性。有研究表明,DMT1表达在细胞质B];还有研究表明,DMT1表达在STB细胞的细胞浆内和基底膜上B间,在铁释放和透过细胞膜转入细胞质中起重要的作用。但BASTIN等四研究结果显示,其在STB细胞不间断、连续地表达,并且在基质细胞中也有表达,与本实验结果相同。由此推断,一方面表达DMT1的部分母体面STB细胞顶部膜凹陷为内吞小体,在内吞小体内Fe+由还原酶还原为Fe*后,Fe2* 可通过DMT1穿过细胞膜进入细胞质,Fe*在STB细胞胞浆中主要以铁蛋白形式贮存,进入胞浆后,铁或以铁蛋白的形式贮存、或参与生物合成或被转出细胞;另-.方面,受细胞外铁浓度的影响,当细胞外铁吸收增多时,30%左右与Fe*结合的DMT1出现内化后以囊泡的形式游离在细胞质中,含铁的囊泡在细胞质中从STB细胞顶部膜上,向基底膜转运铁,随后在基底膜附近Fe*从囊泡中释放出去,最后DMT1内化的囊泡再重新返回母体面STB细胞顶部膜,参与细胞质中铁的转运。进一步确定二价金属离子转运体 1(DMT1)在人胎盘绒毛膜癌细胞(BeWo)中的表达定位,以
    及缺铁状态下 mRNA 的表达变化。


     

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