北纳生物-河南省工业微生物菌种工程技术研究中心

染色体制片过程

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北纳生物-刘亚 2021-02-23 17:09 评论( 0 ) 浏览( 536 )

1. 取处于对数生长期的细胞培养物, 加入秋水仙素到培养液内,终浓度为 0.02-0.8ug/ml。

2. 在37℃培养箱中继续培养1-4小时。秋水仙素处理时间随细胞种类不同及倍增时间的长短而变。

3. 秋水仙素处理后,如培养物为单层细胞,倒出含秋水仙素的培养液,用0.25%胰蛋白溶液消化细胞,使细胞变圆,脱离培养瓶壁,然后加入含血清的培养液,终止胰酶对细胞的作用。 如为悬浮培养细胞,则不需要胰酶处理。

4. 以1000-1200r/min,离心,收集细胞。弃上清液, 将细胞沉淀用5-10ml的低渗液重新悬浮, 在37℃或室温下处理10-20min。离心,收集细胞。

5. 弃上清液,加入2-5ml新鲜配制的固定液,混匀,室温下固定5-10min。离心,收集细胞。

6.重复固定细胞2-3次。

7.将细胞沉淀用少量新鲜配制的固定液,固定液体积为细胞沉淀体积的10-15倍,混匀。

8.用吸管滴加悬液到干净的载玻片上, 使细胞悬液在载玻片上铺展开来, 室温下自然干燥。用相差显微镜观察制片结果。

9. 用Giemsa染液染载玻片10-15min。流

10.水冲洗载玻片,空气干燥。用显微镜明

11.视野观察。

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