北纳生物-河南省工业微生物菌种工程技术研究中心

细胞保藏的原理是什么?常用的保藏方法是什么?

张葡萄-会员头像-www.bncc.org.cn北纳生物
张葡萄 2021-04-09 08:25 评论( 0 ) 浏览( 341 )



微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡,因而常常造成菌种的衰退,并有可能使优良菌种丢失。菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。


首先,应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏,最好保藏它们的休眠体。其次,应根据微生物生理、生化特点,人为地创造环境条件,使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态。这些人工造成的环境主要是干燥、低温和缺氧。另外,避光、缺乏营养、添加保护剂或酸度中和剂也能有效提高保藏效果。


细胞冻存是细胞保藏的主要方法之一。细胞冻存时向培养基中加入保护剂终浓度 8%-12%的甘油或DMSO(二甲基亚砜),可使溶液冰点降低,加之在缓慢冻结条件下,细胞内水分透出,减少了冰晶形成,从而避免细胞损伤。


采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减少细胞内冰晶的形成,从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。


复苏细胞应采用快速融化的方法,这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化,避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。


标准冷冻速度开始为-1到-2℃/min,当温度低于-25℃时可加速,到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。


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