北纳生物-河南省工业微生物菌种工程技术研究中心

沙土保藏法

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曹勋 2019-10-31 17:25 评论( 0 ) 浏览( 134237 )
(1)取河沙加入10﹪稀盐酸,加热煮沸30min, 以去除其中的有机质。(2) 倒去酸水,用自来水冲洗至中性(3) 烘干,用40目筛子过筛,以去掉粗颗粒,备用。(4)另取非耕作层的瘦黄土或红土(不合腐殖质)。加自来水浸泡洗涤数次,直至中性。(5) 烘干,碾碎,通过100目筛子过筛,以去除粗颗粒。(6) 按一份黄土、三份沙的比例掺和均匀,装入小试管(l 0m L×l00mm ),每管装1g左右,塞上棉塞,进行灭菌、烘干。(7)抽祥进行无菌检查,每十支沙土管抽一支,将沙土倒入肉汤培养基中, 37℃培养48h,若仍有杂菌,则需全部重新灭菌,再做无菌试验,若证明无菌,即可备用。(8) 选择培养成熟的(一般指孢子层生长丰满的,营养细胞用此法效果不好)优良菌种,以无菌水洗下,制成孢子悬液。(9) 于每沙土管中加入约0.5mL(一般以刚刚使沙土润湿为宜)孢子悬液,以接种针拌匀。(10)放入真空干燥器内,抽真空,必须在12h小时以内抽干水分。(11) 每10支抽取一支,用接种环取出少数沙粒,接种于斜面培养基上,进行培养,观察生长情况和有无杂菌生长,如出现杂菌或菌落数很少或根本不长,则说明制作的沙土管有问题,尚需进一步抽样检查。(12) 检查如没有问题,则存放冰箱成室内干操处。每半年检查一次活力和杂菌情况。此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌,因此在抗菌素工业生产中应用最广、效果亦好可保存2年左右。但应用于营养效果不不佳。
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