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如何用台盼兰计数活细胞?

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张宜路 2019-11-07 12:03 评论( 0 ) 浏览( 28 )

悬浮细胞怎么判断细胞活力

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    详细实验步骤如下:

    血球计数板每一大方格长为1mm ,宽为1mm ,高为0.1mm ,体积为0.1mm3 ,可容纳的溶液是0.1l ,那么每ml 溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的10000 倍。

    实验步骤

    (一)准备计数板:用酒精清洁计数板和盖玻片,然后用吸水纸轻轻擦干。


    (二)制备细胞悬液:用胰蛋白酶消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞,制成单个细胞悬液。要求细胞密度不低于104 /ml ,若细胞数很少,应将悬液离心(1000rpm ,2min ),重悬浮于少量培养液中。


    (三)加样:将盖玻片盖在计数板两槽中间。用吸管轻轻吹打细胞悬液,吸取少量细胞悬液,在计数板上盖玻片一侧加细胞悬液,加样量不要溢出盖玻片,也不要过少或带气泡。否则要将计数板和盖玻片擦干净重新加样。


    (四)计数:在显微镜下,用10 ×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数,细胞压中线时,只计左侧和上方者,不计右侧和下方者。


    (五)计算:将计算结果代入下式,得出细胞密度。

    细胞数/ 毫升原液= (4 大格细胞数之和/4 )×104 ×稀释倍数


    注意事项

    (一)消化单层细胞时,务求细胞分散良好,制成单个细胞悬液,否则会影响细胞计数结果。


    (二)取样计数前,应充分混匀细胞悬液。在连续取样计数时,特别应该注意这一点,否则前后计数结果会有很大误差。


    (三)镜下计数时,遇到2 个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如细胞团占10% 以上,说明消化不充分;或细胞数少于200 个/10mm2 或多于500 个/10mm2 时,说明稀释不当,需重制备细胞悬液、计数。

    1天前
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    台盼蓝染色是细胞培养常见的实验,用于细胞计数,检测细胞活性。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色。

    三步轻松搞定台盼蓝染色:
    1、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释(10细胞/ml)。
    2、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
    3、计数:在三分钟内,用计数板分别计数活细胞和死细胞 。 

    台盼蓝染色看起来so easy,但新手入门还是需要注意:
    1、染色时间不能太长,否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使检测结果偏离。
    2、可结合细胞计数方法,同时进行细胞计数和活力检测。
    3、有潜在致癌危险,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    1天前
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