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细胞生长曲线

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北纳生物-刘亚 2020-02-03 17:14 评论( 0 ) 浏览( 1002 )
在营养物质一定的体外培养体系中,无菌培养条件下,动物细胞的生长状况和生长速度与接入的细胞密度有关系。描述细胞生长的连续变化中细胞密度与培养时间的关系,往往用细胞生长曲线表示,包括迟缓期、对数生长期、稳定期和衰退期(图9-7)。正确的生长曲线描述,依赖正常的培养条件和无菌操作,并且需要熟练的细胞计数操作。细胞生长曲线是以细胞密度为纵坐标、累计培养时间为横坐标作图描绘的折线图,也可以直接以细胞密度作纵坐标、累计培养时间为横坐标在半对数表上作图描绘的折线图。若每隔24h测定细胞密度,可用天(d)作累计培养时间单位,若隔12h或更短时间测定细胞密度,建议使用小时(h)作累计培养时间单位。作为细胞生长曲线观察用的培养物,在后续培养过程中,不得改变培养体系即培养液的体积,要确保培养条件的稳定。需要换液时采用定量换液方法操作,使用同样体积的新鲜培养液替代废弃培养液,不干扰细胞团,不取出细胞。培养条件包括温度、CO2浓度、趋饱和湿度,一般要求37℃、5%CO2浓度、相对湿度90%以上的条件下进行哺乳动物细胞培养。生长曲线对于哺乳动物细胞培养的意义典型的生长曲线包括迟缓期、对数生长期、稳定期和衰退期这4个时期。生长曲线也是细胞株具有的特有属性,不同细胞株的生长曲线图形不完全一致。日常培养的细胞株用于某种目的前,最好预先培养以便观察其细胞生长曲线,了解该细胞株的合理接种密度。(1)当接种细胞密度足够高时,将不出现典型的迟缓期或迟缓期很短,并且到达衰退期的累计培养时间最短。进行细胞药理或细胞毒理试验时,预培养的细胞接种密度往往控制在1×105-2×105/ml范围,以便在加载供试药物时,所培养的细胞处于对数生长期并已形成单层或接近单层。(2)当接种细胞密度合理时,会出现典型的迟缓期,并且到达衰退期的累计培养时间比较短。正因为如此,进行传代培养、原代培养、扩大培养时,一般细胞培养时都要控制接种密度在2×104-5×105/ml范围。(3)当接种细胞密度太低时,会出现很长的迟缓期,很难观察到对数生长期、稳定期和衰退期,要观察到衰退期的累计培养时间非常长。在依赖哺乳动物细胞培养进行生物制品生产的过程中,尤其需要避免此种细胞密度下的接种培养,以免造成不必要的经济损失和时间浪费。
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