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毫无保留,教你2种细胞集落形成实验

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何女士 2020-08-06 09:52 评论( 0 ) 浏览( 323 )

细胞集落形成实验是检测培养细胞增殖能力的有效方法之一,通过计算集落形成率,来测定测试细胞的增殖能力。

实验前准备: 6孔板、吸管、枪头、血球计数板、基质胶等放入超净工作台消毒30min。

实验一:平板集落形成实验(适用于贴壁细胞)

①取出贴壁率>90%的细胞(处于对数生长期),消化离心,重悬细胞并进行细胞计数。

②6孔板种板:实验分组,每个孔中加入1000个细胞,放入CO2培养箱培养。

③培养1周后,当肉眼可见集落形成时,取出6孔板,弃除培养液,每孔加入2mL甲醇固定30min,弃除甲醇,每孔加入2mL0.1%结晶紫染色3min,然后清洗掉结晶紫,数码相机拍照,光镜下计数集落。


实验二:软琼脂集落形成实验 (适用悬浮细胞)

1.收集对数生长期的细胞进行活细胞计数,然后调整细胞浓度,用含20%FBS的DMEM制成1000活细胞/ml的细胞悬液。

2.用蒸馏水制备1.2%、0.7%两个浓度的低熔点琼脂糖,高压灭菌后,维持在40℃不会凝固;

3.1.2%琼脂糖和2xDMEM等体积混合,6孔板中加入1.4ml,室温凝固作为底层琼脂,置CO2温箱中备用;

4.0.7%琼脂糖和2xDMEM等体积混合,再加入细胞悬液充分混匀,室温凝固作为上层琼脂,勿有气泡,将实验组和对照组分两组加好,盖上盖并作好标记。在室温放置20分钟使细胞琼脂悬液凝固。

5.然后移培养板或平皿于CO2培养箱中37℃进行培养。

6.培养7-10天,肉眼观察并计数细胞集落。

结果判定:以肉眼可见的细胞团作为计数集落的标准。

集落的计数和计算:集落数=n孔中细胞集落数总和/n孔,

集落形成率=集落数/接种培养细胞总数×100%


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