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细胞系贴壁细胞收到后处理注意事项:

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婷婷 2020-10-21 17:43 评论( 0 ) 浏览( 217 )

1、先观察细胞培养瓶是否完好,培养基是否有漏液,变浑浊的情况

2、在培养箱稳定2-4h

3、显微镜下拍照(40倍,100倍,200倍)填写到产品使用意见反馈表(最好每次细胞处理都拍照,记录操作细节填写表格)

4、传代或换液

a、在操作前先取培养液空培3天

b、一般细胞密度达到80%左右即可传代(一般发货细胞密度80%左右)

c、换用新鲜完全培养基(完全培养基一般建议先配好空培2-3天没问题再使用)

d、细胞传代时时间掌控好,很多细胞一分钟以内即可,神经细胞30秒,对于难消化的细胞分次消化收集细胞单次3min,可以用胰酶吹下来再加培养基终止

e、传代时注意细胞要吹散,加胰酶的时候不要对着细胞吹,沿培养皿或培养瓶内壁加胰酶

f、胰酶消化时先加胰酶,把细胞润洗(这个时间有点短),再将胰酶吸出,后放培养箱消化(消化时间控制好),一般细胞变圆就慢慢终止消化;

g、切记不要:先加胰酶消化再吸出胰酶,这个时候胰酶已经发挥作用了,很多细胞都脱落了,细胞悬液都吸出来了。

h、终止消化时,枪头不要直接垂直对着细胞吹,力度不能太大

i、收到细胞第一次传代时,一般接种密度1/2,不要太稀,传代当时拍照,第二天再观察拍照,观察细胞状态,展开程度,是否有生长,是否要传代,开始两代不建议冻存,等细胞状态稳定后再冻存

j、开始传代几次以熟悉细胞状态生长速度,后根据细胞生长速度再按相应比例传代

注:一般收到细胞开瓶后的处理这一步很容易引起污染,希望能够重视操作细节,操作前紫外灯照射30min,实验台最好没有操作其他细胞,实验用的所有无菌器材最好是刚灭过菌的,相应培养基提前配置,空培3天,没问题再使用,用75%酒精喷拭细胞培养瓶,尤其是瓶口周围,最后多喷拭几遍手套











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