北纳生物-河南省工业微生物菌种工程技术研究中心

药品中大肠埃希菌的检验

发布时间:2021-10-12 16:28 作者:北纳生物编辑-陈丹

大肠埃希菌,俗名大肠杆菌( 革兰氏阴性短杆菌),周身鞭毛,能运动,无芽。是人和动物肠道中的正常栖居菌。大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。根据致病性的不同,致泻性大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌肠出血性大肠埃希菌5种。部分埃希菌菌株与婴儿腹泻有关,并可引起成人腹泻或食物中毒的暴发。今天小编给大家简述一下如何对药品中大肠埃希菌的检验。

(1)按细菌总数测定方法制备供试液。

(2)取供试品l:10稀释液10mL,接种在制好的100mL胆盐乳糖培养基中,在37℃恒温箱中培养18~24 h,进行增菌培养。

(3)用接种环挑取上述培养物接种在麦康凯琼脂平板(MacC)或伊红美蓝琼脂平板(EMB)上,置37℃培养18~24 h,进行分离培养。观察有无鲜桃红色或微红色、中心深桃红色、圆形、扁平、边缘整齐、表面光滑、湿润的菌落形成。

(4)挑取2~3个疑似大肠埃希菌菌落,分别接种在营养琼脂斜面培养基上,在37℃下培养18~24 h,进行纯培养。

(5)将疑似大肠杆菌的培养物涂片进行革兰染色,经镜检证明为G-无芽孢短杆菌的,应继续做生化试验。

(6)生化试验

①乳糖发酵试验

将上述纯培养物接种在乳糖发酵管中,在37℃下培养24~48 h。凡大肠埃希菌,可发酵乳糖产酸产气。②靛基质试验。将上述纯培养物接种在蛋白胨水培养基中,在37℃下培养(48±2)h.加入0 .3~0 .5 mL靛基质试液(对二甲基氨基苯甲醛),观察液面。液面呈玫瑰红色为阳性反应,呈试剂本色为阴性反应。

③甲基红试验

将纯培养物接种在磷酸盐葡萄糖胨水培养基内,在37℃下培养(48±2)h,在1 rnL培养液中加入l滴甲基红试剂,立即观察结果。呈鲜红色或橘红色为阳性反应。呈黄色为阴性反应。

④乙酰甲基甲醇生成试验(VP试验)

将纯培养物接种在磷酸盐葡萄糖胨水培养基内,在37℃下培养(48±2)h,在2mL培养液中加入α一萘酚乙醇液1 mL_,混匀,再加入质量分数为40%的氢氧化钾溶液0.4mL后观察结果。培养液应在加入试剂后的4 h内呈红色为阳性反应,无红色为阴性反应。

⑤枸橼酸盐利用试验

将纯培养物接种在枸橼酸盐斜面培养基上,在37℃下培养(48±2)h,观察结果。斜面有菌生长,培养基由绿色变为蓝色为阳性反应,斜面无菌生长培养基仍呈绿色为阴性反应。

(7)判断结果

经染色镜检证实为G–无芽孢短杆菌,乳糖发酵试验产酸产气,IMVC试验结果为++––或–+––的,可确认供试品中含有大肠埃希菌。

相关链接:大肠埃希菌肠毒素性大肠埃希菌肠道侵袭性大肠埃希菌甲基红枸橼酸北纳生物

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