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RP-HPLC混标加样增量法快速测定食品中的阿斯巴甜和阿力甜(一)

发布时间:2021-01-08 16:55 作者:陈丹
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阿斯巴甜即天门冬酰苯丙氨酸甲酯,是一种天然功中稳定,高pH值或高温下会水解而导致甜味丧失身1。 能性低聚糖,甜度是蔗糖的200倍。在pH3〜5的溶液    阿力甜又称为天胺甜精,甜度为蔗糖的2 000倍以上,极易溶于水或溶于含羟基的溶剂中。室温下阿力甜在 pH4的条件下能稳定2a,在pH5〜8的水溶液中能稳定 4a以上*%阿斯巴甜和阿力甜复合使用可以协同增效、 降低成本、改善口感、提高甜味的稳定性,不但甜度 高、味质好,且储存期长、无热量,是常用的食品甜味剂。但若使用过量可能会出现人体肝脏被破坏、神经系 统紊乱、致癌等不良影响皿坷。

目前,食品中测定阿斯巴甜和阿力甜的方法有高效 液相色谱法四、超高效液相色谱法四、反相高效液相色 谱法㈣、液相色谱-串联质谱法叫23〕、超高效液相色谱-串联质谱法国网、离子色谱法㈣等,而且常用外标法、内标法或归一化法进行定量分析。

外标法需要绘制标准曲线,标准液和待测液要分开进行测定,不能实现同时、同步分析,容易受到仪器条件以及环境因素的影响。内标法需要先用标准液求得各 待测组分和内标物的相对校正因子,代入相应公式计算 结果。对复杂样品,有时很难找到合适的内标物,也无法确定样品中是否不含所用的内标物,很难及时开展工 作。归一化法要求样品中所有组分全部出峰、并产生测 定信号,样品中各组分的相对含量之和应为100%。要求 知道各组分的校正因子,操作较为繁琐。这些测定方法 操作繁杂,需测定空白溶液、绘制标准曲线或进行复杂 计算,工作效率较低。

混标加样增量法是一种新型分析技术,克服了上述 分析方法的不足,只需取2份完全相同的阿斯巴甜和阿力甜混合标准液,依次加入不同体积的试液,混匀后在同 一条件下进行测定。以同一保留时间下组分色谱峰信号 是否有增加进行定性分析,以混合标准液加样后色谱峰 信号值代入公式进行定量分析,无需绘制标准曲线和测 定空白溶液,具有成本低、工作效率高、测定速度快、 干扰少、准确度高、适用范围广等突出优点。

1材料与方法

1.1材料与试剂

可口可乐、菊花晶、酸奶、浓缩果汁、巧克力制品 市售。甲醇(色谱纯)、乙醇(优级纯)、阿力甜标准品 (C14H25N3O4S, CAS号:80863-62-3,纯度为99.2%) 上海安谱实验科技股份有限公司;阿斯巴甜标准品 (C14H18N2O5, CAS号:22839-47-0,纯度为95%) BePune实验科技有限公司。

1.2仪器与设备

A100250多管涡旋混合仪月旭科技股份有限公司; MS150/MS205DU电子天平(十万分之一)长沙市秋龙仪器设备有限公司;Dynamica V18R台式冷冻离心机北京五洲东方科技发展有限公司;SB25-12DTD型超声波清洗机宁波新芝生物科技股份有限 公司;Utimate3000(2017LH131)高效液相色谱仪、 Hypersil GOLD C”色谱柱(150 mmX 4.6 mm)美国赛默飞科技股份有限公司。

1.3方法

1.3.1标准混合液的制备

乙醇溶液:取40 mL乙醇,与20mL水均匀混合; 80%甲醇溶液:取80mL甲醇,用水定容到100mL容量瓶 中;50%甲醇溶液:取50mL甲醇,用水定容到100mL容 量瓶中。

阿斯巴甜和阿力甜标准储备液的配制(0.50mg/mL): 称取阿斯巴甜0.02632g (精确至0.0001g),称取阿力 甜0.02520g (精确至0.0001g),用水将阿斯巴甜和阿 力甜分别溶解至50mL容量瓶内并定容至刻度,置于4-C 左右的冰箱中保存,有效期为90d。

1.3.2试液的制备和测定

阿斯巴甜和阿力甜混合标准工作液系列的配制:将 阿斯巴甜和阿力甜标准储备液用水逐级稀释,并将2种 标准溶液等浓度等体积混合。分别制得50.00、45.00、 40.00、35.00、30.00、25.00、20.00、10.00、5.00、 2.50、1.00、0.50 gg/mL阿斯巴甜和阿力甜的混合标准溶 液,置于4 P左右冰箱保存,有效期为30d。

1.3.2.1碳酸饮料、固体饮料样品处理

称取约5.0000g (精确到0.001g)碳酸饮料试样于 50mL烧杯中,超声振荡除去二氧化碳,转入25 mL容量 瓶中,用水定容,备用。

称取约1.0000g (精确到0.001g)固体饮料试样于 50mL烧杯中,加10mL水,超声振荡提取20min,移入 25 mL容量瓶中;再向烧杯中加入10mL水超声振荡提取 10min,将2次提取液移入同一个25mL的容量瓶中,用水定容备用。

将上述容量瓶的液体分别4000 r/min离心5min,取 上清液用0.45 pm的水系滤膜过滤后得待测试液,用于液 相色谱分析。

1.3.2.2酸奶、乳饮料样品处理

称取5.0000g (精确到0.001g)酸奶试样于50mL离 心管中,加入10mL乙醇,沉淀酸奶试样中的蛋白质,盖 紧盖子;上下轻轻颠倒离心管5次(不能振摇),将离心 管混匀涡旋10 s后,静置1 min, 4 000r/min离心5min, 取上清液滤入25mL容量瓶中,滤渣用8 mL乙醇溶液洗 涤后再离心,离心后的上清液移入同一个容量瓶,用乙 醇溶液定容至25mL,混匀,用0.45pm有机系滤膜过滤 后得待测试液,用于液相色谱分析。

1.3.3色谱分析

取2份完全相同的混合标准液于离心管A和B中,离心管A中加入体积为*的待测试液,离心管B中加入体积为厶的待测试液,其中厶>%;在同一色谱条件下,对离心管A中混合液进行色谱分析,得出阿斯巴甜保留时间 么及对应的出峰信号方A1,阿力甜保留时间偽及对应的出 峰信号&2;对离心管B中混合液进行色谱分析得出阿斯巴甜的保留时间知及对应的出峰信号加1,阿力甜的保留 时间氐2及对应的出峰信号方B2。当41 =知,方Bl_& 1>0, 则待测食品中含有阿斯巴甜;当tA2 = tB2,加2—五A2>, 则待测食品中含有阿力甜。

1.3.4测定原理和公式

在一定条件下测定时,测定信号与待测组分的量呈正比,因此有:
                                                ms+mA=kXhx    (1)
                                                ms+ms=k'Xhs    (2)

在完全相同的条件下测定时,比例常数4相同, 式(1)除以式(2)有:
                                                ms+mA = hA
                                                ms+mB hB
                                            即:
                                                ms+p^VA _ Aa ms+pX-VB hB
                                            因此,
                                                =gX (方a_ 方B)=    (/?b_ 方 A)
                                                P~ ^xab-^xaa _ vBxhA-vAxhB
                                                _ m _ pX 峰

式中:£为试液中阿斯巴甜或阿力甜的质量浓 度/ (瞄/皿);码为混合标准液中阿斯巴甜或阿力甜的质量/瞄;%为离心管A中加入试液的体积/piL;厶为离 心管B中加入试液的体积/^L; mjOmB分别为试液加入 A管和B管中的组分质量/^g;样为总的试液体积/^L;样为总样品质量/g; m为总样品中阿斯巴甜或阿力甜的 质量/|ig; &、加分别为AB离心管中阿斯巴甜或阿力甜测得峰高信号值。

相关链接:阿斯巴甜阿力甜甜味剂超高效液相色谱法甲醇乙醇北纳生物

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