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胰酶消化的时间问题,以下可以收藏供客户参考

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北纳生物沈光丽 2021-01-29 08:49 评论( 0 ) 浏览( 425 )

消化一定要注意控制胰酶作用时间,胰酶消化是需要比较精细的操作,既要充分消化下细胞打散成单细胞悬液,均匀接种,又要避免消化过度造成细胞严重受损 。

每个客户用的胰酶活力及消化步骤、试剂都是不一样的,不能完全规定消化时间,以客户经验为准。

对于消化这步,客户如果对该细胞经验不多,无法准确掌控胰酶作用时间 建议客户按照下述操作:胰酶首先复温到室温后加入细胞,然后每隔30秒,即吹打下细胞,如果能够吹打散细胞,加入完全培养基终止消化,如果30秒吹打不下,再等30秒重复操作。加6-8ML完全培养基终止消化,混匀细胞,收集细胞悬液900-1000rpm离心3min,弃上清。再加5ml PBS重悬细胞,再离心后,用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片,如果平时碎片比较少,传代时可以省略PBS重悬的步骤;如果碎片很多,建议PBS多洗一次。

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