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大肠杆菌如何建立和评价PCR检测方法?

赵强-会员头像-www.bncc.org.cn北纳生物
赵强 2021-03-19 12:15 评论( 0 ) 浏览( 316 )

1.取大肠杆菌菌液1 mL,12000 r/min,4℃离心2 min,弃上清液。

2.按照细菌基因组DNA提取试剂盒的操作步骤提取大肠杆菌基因组DNA。

3.对大肠杆菌中毒力基因 escV、stx2和hyA进行PCR反应体系和反应程序的优化,并对所建立的PCR反应进行特异性和灵敏度实验。

4.用金黄色葡萄球菌、阪崎肠杆菌、沙门氏菌和单核细胞性李斯特菌进行引物特异性实验。

5.将提取的大肠杆菌全基因组DNA进行10倍梯度倍比稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5和10-6系列浓度,进行检测灵敏度实验,将同一批不同稀释度的稀释液按建立的方法进行3次重复实验,分析此方法的重复性。

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