北纳生物-河南省工业微生物菌种工程技术研究中心

视网膜色素上皮细胞的培养方法

致你i-会员头像-www.bncc.org.cn北纳生物
致你i 2021-12-02 08:30 评论( 0 ) 浏览( 97 )

视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium)是由单层色素上皮细胞所构成,排列十分规则。细胞呈多角形,细胞分为三部分,即顶部、体部和基底部。每只眼越有4.2-6.1百万个视网膜色素上皮细胞。视网膜色素上皮细胞无再生能力,细胞死亡后不被替换,而是邻近的细胞向侧面滑动,以填补死亡细胞遗留下来的空间。 该细胞的培养方法如下: 培养基:DMEM-H。 传代方法:将旧培养液吸除,PBS清洗两遍后,加入6mL(/100mm皿)胰酶,在显微镜下观察,期间禁止摇晃培养皿,细胞刚有脱落时,则吸除大部分胰酶,留约0.5mL,移至培养箱消化,约2min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化,轻轻吹打均匀细胞,后可分3~6皿培养; 生长条件:37℃,5%CO2,CM1-1培养液。CM1-1培养液:90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H:DMEM高糖培养液,含谷氨酰胺,含丙酮酸钠。 存储条件:冻存则用6mL冻存液(90%FBS+10%DMSO)终止消化,吹打均匀,分为6支冻存管,用程序降温盒于-80℃冻存,过夜转移至液氮中保存。

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