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BNCC冻干粉菌株活化及注意事项

吴越-会员头像-www.bncc.org.cn北纳生物
吴越 2022-04-15 16:32 评论( 0 ) 浏览( 547 )
冻干粉菌株活化步骤: 1.首先请仔细阅读随货说明书和打管说明,提前配制好培养基和准备好相关的仪器和耗材。 2.准备工作完成后,在生物安全柜中打开安瓿管(推荐使用打管说明中的方法①砂轮开管法)。 3.打开安瓿管后,用无菌巴氏吸管吸取300~500uL液体培养基,缓慢打入冻干粉上层,待冻干粉吸水溶解后用巴氏吸管缓慢轻柔吹吸混匀,制成菌悬液。 4.将菌悬液全部转移到一支5~10mL的液体培养基中,用巴氏吸管吹吸混匀,然后吸取200uL菌悬液打入平板中,涂布均匀,重复两次获得两个平板 5.将液体试管和涂布平板放置在说明书要求的温度和气体环境中培养。 注意事项: 步骤1的培养基建议现用现配,不建议使用存放超过1个月的培养基,推荐使用商品化培养基干粉或者购买BNCC菌株即用型平板。活化用到的主要仪器是生物安全柜,生物安全等级为二级的微生物建议在P2实验室操作,最低也要有生物安全柜。常用的耗材有无菌巴氏吸管和无菌涂布棒。有些实验室喜欢用移液枪+枪头的组合来复溶冻干粉和转移菌悬液,可1mL蓝色枪头较粗,不方便吸取安瓿管中的菌悬液,同时有些菌悬液需要打入液体试管底部,这时枪头的长度不够。我们建议使用市售的一次性无菌巴氏吸管。 步骤2推荐使用砂轮开管的方法是这个方法效率较高。本实验室的安瓿管较厚,酒精灼烧滴水的方法用时较长且可能会烫伤实验人员,同时这有会不均匀破裂,有划伤的风险。安瓿管是玻璃制品,使用完毕后请丢弃到利器盒中,集中灭菌处理。 步骤3一开始打入液体要注意液面高度和冻干粉溶解状态,不可打入太快造成液体漫出安瓿管,如果有液体溅出应立即用酒精棉球覆盖。 步骤4中的液体培养基可以参考成表,去掉成分表中的琼脂成分即可。但有些菌暂无液体培养基推荐,这时溶解冻干粉的液体可以是无菌水,也可以用实验室常用的NB或TSB等常见的液体培养基(注意:这个只是用来溶解冻干粉,不要用这个溶解液培养菌株)。厌氧菌尽量打入液体试管底部,厌氧环境更好。同时,首次活化为了保证活化成功,需要较高的接种浓度,首次活化不要划线接种!冻干粉请一次性使用完毕,不得留存! 步骤5中刚涂布的平板可以先正置培养箱1个小时左右再倒置,也可以一直正置。好氧微生物的平板可以不用封口膜包起来,有些好氧菌封口膜包起来后会发生生长缓慢等现象。 BNCC同时也拍摄了微生物操作的系列视频,大家可以去下面的网址了解详情。 https://www.bncc.org.cn/course/206_0_3.html
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