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解读细胞抱团

孙禛禛-会员头像-www.bncc.org.cn北纳生物
孙禛禛 2022-06-02 10:46 评论( 0 ) 浏览( 323 )

1.细胞抱团一定代表细胞状态不好吗? 细胞生长的时候肯定是要相互联系,大部分的细胞都是要成片生长的,应该仔细观察每种细胞的状态,抱团并不一定代表不好:若细胞轮廓清晰,可看清楚一个个的细胞,像葡萄一样,一串串的,是状态好的,说明细胞在分裂。但大部分细胞抱团绝对不是一件好事!如果轮廓消失,出现细胞融解或细胞变灰暗、透光性变差,就是细胞死亡了。葡萄状和抱团,在镜下其实很容易区别。抱团死亡的细胞可以看到细胞碎片 2.细胞抱团是因为细胞污染了吗? 一般细胞培养液清亮,就不是污染。如果是污染了的话,可以通过观察培养液颜色,若污染,则很浑浊。 3.细胞为啥总是喜欢抱团? 细胞死亡释放出DNA,缠绕其他细胞,形成黏性的细胞团(消化的过程可能过于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太强或有毒性等)。细胞离心速度过大或时间太长。消化不完全的时候,细胞和细胞之间的连接没有分开;消化过度的时候,圆形的细胞容易聚堆,再分开很困难!状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差)。 传代时没有吹打均匀,细胞团多,培养时就会是一团一团的。传代后细胞铺板不均匀。有可能是杂细胞,或者死细胞。接种不均匀,或者是细胞未消化开。非震荡培养或细菌(胞)量过多的话就会成团。 4.如何避免细胞成团? 用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。对于贴壁非常牢固的细胞(如MDCK),为了细胞更好的状态,更漂亮的样子,建议分多批多次消化,这样才能最大限度地降低胰酶对细胞的损伤,保证细胞的状态能够最优。细胞生长密度不要太高,70%-80%就好(细胞刚刚基本成单层细胞,没有出现成层生长),这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落,可先将细胞低密度传代,第二天再消化传代,这样连续传三次,细胞抱团就会越来越小,这样几代过后,再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶,这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个(因为细胞没有受力点了,所以细胞很难分散开)。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开,严格控制好消化程度。 5.细胞抱团了,要如何处理? 如果细胞抱团不影响生长就没问题,只是计数时较麻烦。在消化时,可在细胞由多角形变成圆型之前,用手轻磕培养瓶的侧壁,使细胞从壁上脱落(最好不要吹打,对细胞形状和生长都不好)。如果感觉有死细胞的DNA,在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞,防止对细胞膜造成物理损伤。如果细胞抱团是肉眼可见的,可让细胞静置半分钟左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,目前还没有特别好的分离方法,只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。 总结 引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差,且在吹打细胞的时候,那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损,所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性,让细胞保持较好的生长状态。

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