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荧光细胞株

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张宜路 2020-02-03 17:07 评论( 0 ) 浏览( 1969 )

荧光细胞

一、荧光细胞能够产生荧光的活细胞为荧光细胞,如:LLC/LUC 、4T1/LUC、 B16/luc、A549/GFP、SMMC7721/GFP (luc 荧光素酶、GFP 绿色荧光蛋白

二、荧光的原理分子吸收入射能量后电子从基态跃迁到激发态,再从激发态回到基态而发出的可见光。

三、荧光显微镜 

1.光源,能够产生短波长的光。

2.激发光滤片,只允许特点的波长的光通过。 

3.双分镜,是短波长的光反射,长波长的光通过,到达目镜。

四、常见荧光分子 

1.罗丹明,标记蛋白质 

2.DAPI ,标记DNA 

3.绿色荧光蛋白GFP

4.红色荧光蛋白 

5.萤火虫荧光素酶五、 

荧光活细胞试剂盒 

     一. 试剂盒说明荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称,其中最有代表性的是来自北美萤火虫(Photinus pyralis)体内的荧光素酶。萤火虫荧光素酶属于加氧酶(oxygenase),其发光反应需要O2和Mg2+参与;有辅酶A(CoA)存在时能提高反应效率,增加发光时间。萤火虫荧光素酶无需翻译后修饰,即可表现出荧光素酶活性。本产品将萤火虫荧光素酶的基因插入慢病毒介导的载体中,通过CAG启动子过表达从而作为报告基因,在细胞中表达。常用于细胞标记后小动物细胞移植活体成像追踪,从而评估移植后细胞的归巢以及治疗效果等。

    二.试剂盒组份组份Cat:储存条件   

萤光素酶标记液   1 ml     -80 ℃

polybrene    8μg/ml     4 ℃ 

    四. 操作步骤 细胞传代培养到6孔板或者6cm盘中12-16小时后,将萤光素酶标记液0.3ml(6孔板)或者0.5ml(6cm盘)分别与新鲜细胞培养液混匀,比例为0.3ml萤光素酶标记液中加入0.7ml新鲜培养液和1.0μl polybrene(终浓度8ng/ml),0.5ml萤光素酶标记液中加入1.5ml新鲜培养液和2μl polybrean(终浓度8ng/ml)。预混好的萤光素酶标记液加入到目的细胞培养皿中,此时细胞密度不宜超过60%。2个小时之内每间隔15-30min轻轻晃动被标记的细胞培养皿,可以达到更好的标记效果,2小时之后培养皿中补充等体积的新鲜培养液,过夜培养后更换成新鲜培养液。48h之后,利用Progema公司生产的萤光素酶检测试剂盒检测标记效果。


二、红色荧光蛋白标记试剂盒 

一. 试剂盒说明mCherry是一种来自于蘑菇珊瑚(mushroom coral)的红色荧光蛋白,常有于标记和示踪某些分子和细胞组分。相对于其他荧光,mCherry的好处在于它的颜色和应用最多的绿色荧光蛋白(GFP)能进行共同标记,并且mCherry相对于其他单体荧光蛋白来说也具有卓越的光稳定型。本产品将红色荧光蛋白的基因插入慢病毒介导的载体中,通过flap-Ub 启动子过表达从而作为报告基因,在细胞中表达。常用于细胞标记后移植追踪,从而评估移植后细胞的归巢以及治疗效果等。二.试剂盒组份组份Cat:储存条件红色荧光蛋白标记液1 ml 4 ℃ polybrene 8 μg/ml 4℃ 四. 操作步骤 细胞传代培养到6孔板或者6cm盘中12-16小时后,将红色荧光蛋白标记液0.3ml(6孔板一个孔中)或者0.5 ml(6cm盘)分别与新鲜细胞培养液混匀,比例为0.3ml红色荧光蛋白标记液中加入0.7ml新鲜培养液和1.0 μl polybrene(终浓度8ng/ml),0.5ml红色荧光蛋白标记液中加入1.5ml新鲜培养液和2 μl polybrean(终浓度8ng/ml)。预混好的红色荧光蛋白标记液加入到目的细胞培养皿中,此时细胞密度不宜超过60%。2个小时之内每间隔15-30min轻轻晃动被标记的细胞培养皿,可以达到更好的标记效果,2小时之后培养皿中补充等体积的新鲜培养液,过夜培养后更换成新鲜培养液。48小时之后,在荧光显微镜下观察标记红色荧光效率。

三、绿色荧光试剂盒

一. 试剂盒说明绿色荧光蛋白1962年在一种学名Aequoreavictoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色萤光。这个发光的过程中还需要冷光蛋白质Aequorin的帮助,且这个冷光蛋白质与钙离子(Ca2+)可产生交互作用。本产品将绿色荧光蛋白的基因插入慢病毒介导的载体中,通过flap-Ub启动子过表达从而作为报告基因,在细胞中表达。常用于细胞标记后移植追踪,从而评估移植后细胞的归巢以及治疗效果等。

二.试剂盒组份组份Cat:储存条件绿色荧光蛋白标记液1 ml 4 ℃ polybrene8 μg/ml 4℃ 

四. 操作步骤 细胞传代培养到6孔板或者6cm盘中12-16小时后,将绿色荧光蛋白标记液0.3ml(6孔板一个孔中)或者0.5ml(6cm盘)分别与新鲜细胞培养液混匀,比例为0.3ml绿色荧光蛋白标记液中加入0.7ml新鲜培养液和1.0μl polybrene(终浓度8ng/ml),0.5ml绿色荧光蛋白标记液中加入1.5ml新鲜培养液和2μl polybrean(终浓度8ng/ml)。预混好的绿色荧光蛋白标记液加入到目的细胞培养皿中,此时细胞密度不宜超过60%。2个小时之内每间隔15-30min轻轻晃动被标记的细胞培养皿,可以达到更好的标记效果,2小时之后培养皿中补充等体积的新鲜培养液,过夜培养后更换成新鲜培养液。48小时之后,在荧光显微镜下观察标记绿色荧光效率。

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