北纳生物-河南省工业微生物菌种工程技术研究中心

细胞为什么会抱团?

杨晴-会员头像-www.bncc.org.cn北纳生物
杨晴 2020-08-17 15:41 评论( 2 ) 浏览( 1956 )

是细胞污染了还是正常现象?

是消化不好了还是铺板有问题?

抱团细胞越来越多,怎么样才能让细胞分开生长?

细胞抱团一定代表细胞状态不好吗?

细胞生长的时候肯定是要相互联系,大部分的细胞都是要成片生长的,应该仔细观察每种细胞的状态,抱团并不一定代表不好:

1.若细胞轮廓清晰,可看清楚一个个的细胞,像葡萄一样,一串串的,是状态好的,说明细胞在分裂。

2.但大部分细胞抱团绝对不是一件好事!如果轮廓消失,出现细胞融解或细胞变灰暗、透光性变差,就是细胞死亡了。葡萄状和抱团,在镜下其实很容易区别。抱团死亡的细胞可以看到细胞碎片

3.细胞抱团是因为细胞污染了吗?一般细胞培养液清亮,就不是污染。如果是污染了的话,可以通过观察培养液颜色,若污染,则很浑浊。


细胞为啥总是喜欢抱团?

1.细胞死亡释放出DNA,缠绕其他细胞,形成黏性的细胞团(消化的过程可能过于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太强或有毒性等)。

2.细胞离心速度过大或时间太长。

3.消化不完全的时候,细胞和细胞之间的连接没有分开;消化过度的时候,圆形的细胞容易聚堆,再分开很困难!

4.状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差)。

5.传代时没有吹打均匀,细胞团多,培养时就会是一团一团的。

6.传代后细胞铺板不均匀。

7.有可能是杂细胞,或者死细胞。

8.接种不均匀,或者是细胞未消化开。

9.非震荡培养或细菌(胞)量过多的话就会成团。


如何避免细胞成团?

1.用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。

2.对于贴壁非常牢固的细胞(如MDCK),为了细胞更好的状态,更漂亮的样子,建议分多批多次消化,这样才能最大限度地降低胰酶对细胞的损伤,保证细胞的状态能够最优。

3.细胞生长密度不要太高,70%-80%就好(细胞刚刚基本成单层细胞,没有出现成层生长),这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落,可先将细胞低密度传代,第二天再消化传代,这样连续传三次,细胞抱团就会越来越小,这样几代过后,再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。

4.消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶,这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个(因为细胞没有受力点了,所以细胞很难分散开)。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开,严格控制好消化程度。


细胞抱团了,要如何处理?

1.如果细胞抱团不影响生长就没问题,只是计数时较麻烦。在消化时,可在细胞由多角形变成圆型之前,用手轻磕培养瓶的侧壁,使细胞从壁上脱落(最好不要吹打,对细胞形状和生长都不好)。

2.如果感觉有死细胞的DNA,在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞,防止对细胞膜造成物理损伤。

3.如果细胞抱团是肉眼可见的,可让细胞静置半分钟左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,目前还没有特别好的分离方法,只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。

点赞图片

登录后才可以评论

立即登录
发表评论
楼主动态
相关推荐
  • 小胶质细胞的生物学功能 小胶质细胞具有多突触及可塑性的特点,为中枢神经系统内固有的免疫效应细胞,在中枢神经系统的生理过程中发挥着极其重要的作用。首先,小胶质细胞对于神经系统的正常发育是必需的。在大脑发育的早期阶段,约20%~80%具有长投射轴突的神经元发生凋亡并迅速被清除,激素、神经递质或分泌的蛋白质等细胞外信号可与神经元上的特异性受体结合,促进神经元的存活或启动神经元发生程序性细胞死亡,从而对中枢神经系统内神经元的数量...
  • 天然抗菌肽食源性致病菌均有较强的抑制作用 荔枝果实在采摘前后都容易遭受病原菌的入侵,主要腐败菌包括霜疫霉、黑曲霉、黄曲霉、青霉等,目前,荔枝采后病原菌的防治仍然主要依靠化学药物,如广谱低毒的杀菌剂等。抗菌肽原指昆虫体内经诱导而产生的一类具有抗菌活性的碱性多肽物质,活性多肽多数具有强碱性、热稳定性以及广谱抗菌等特点。抗菌肽粗提物中主要作用物质包括具有广谱性、高效性的天然抗菌肽以及少量乳酸,对多种常见的食源性致病菌均有较强的抑制作用。另外,荔...
  • 星形胶质细胞的培养方法 星形胶质细胞(astrocyte),是哺乳动物脑内分布最广泛的一类细胞,也是胶质细胞中体积最大的一种。用经典的金属浸镀技术(银染色)显示此类胶质细胞呈星形,从胞体发出许多长而分支的突起,伸展充填在神经细胞的胞体及其突起之间,起支持和分隔神经细胞的作用。该细胞的培养方法如下:传代方法:将旧培养液吸除,PBS清洗两遍后,加入6mL(/100mm皿)胰酶,在显微镜下观察,期间禁止摇晃培养皿,细胞刚有脱落...
  • 炭疽杆菌微生物学检查 一、细菌学检查1、涂片镜检病料涂片以碱性美蓝、瑞氏染色或姬姆萨染色法染色镜检,如发现有典型的炭疽杆菌,即可作出初步诊断,材料不新鲜时菌体易消失。2、分离培养取病料接种于普通琼脂或血液琼脂,37℃培养18~24h,观察有无典型的炭疽杆菌菌落,同时涂片作革兰染色镜检。3、动物感染试将被检病料或培养物用生理盐水制成1:5乳悬液,皮下注射小鼠0.1mL或豚鼠、家兔0.2~0.3mL。动物通常于注射后24~...
  • 猪睾丸间质细胞的培养方法 猪睾丸间质细胞成群分布在曲精小管之间,胞体呈圆形,椭圆形或不规则形,胞体较大,直径约20μm,胞质呈嗜酸性,细胞核呈圆形或卵圆形,常位于中央,染色较淡,有1~2个核仁线粒体多,呈管嵴状,无分泌颗粒。猪睾丸间质细胞的培养方法如下:传代方法:将旧培养液吸除,PBS清洗两遍后,加入6mL(/100mm皿)胰酶,在显微镜下观察,期间禁止摇晃培养皿,细胞刚有脱落时,则吸除大部分胰酶,留约0.5mL,移...
推荐产品
请告知您的电话号码,我们将立即回电

通话对您免费,请放心接听

温馨提示:

1.手机直接输入,座机前请加区号 如13164239859,010-58103778

2.我们将根据您提供的电话号码,立即回电,请注意接听

3.因为您是被叫方,通话对您免费,请放心接听

关闭
大抽奖
请设置您的密码:
分享到微信