北纳生物-河南省工业微生物菌种工程技术研究中心
培养基 | DMEM-H完全培养基:90%DMEM-H+10%FBS |
传代方法 | 复苏步骤:①冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速没入37℃水浴锅,摇晃冻存管加速溶解,以1min内全部溶解为宜;②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内,1000-1200rpm离心5min,弃去上清液,用1-2mL完全培养基重悬细胞。③将细胞悬液加入到含有5-6mL完全培养基的T25瓶中,放入培养箱培养。 细胞传代:①将旧培养液吸除,PBS清洗两遍后,加入1-2mL胰酶(0.25%Trypsin+0.02%EDTA);②镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时(可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处,肉眼可见细胞层脱落,即消化完成,否则继续消化),直接吸掉胰酶,加入5-6mL完全培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。③将细胞悬液按1:2比例分到新的T25瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。;④注意培养基pH值变化和细胞密度,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%-90%时,重复传代操作或者冻存。 |
生长条件 | 培养温度37℃;气体环境5%CO2+95%空气; |
生长特性 | 贴壁生长 |
存储条件 | 液氮 |
安全等级 | 2 |
形态 | 上皮细胞样,多角形,边缘不规则,单层贴壁生长,背景干净,无空泡,不产色素 |
分离基物 | 肝 |
共享方式 | 公益性共享 |
一、细胞名称:McA-RH777
二、货号:BNCC337991
三、生长特性: ■ 贴壁 □ 悬浮 □ 半悬浮半贴壁
四、细胞生长条件:
培养基 | 90% 高糖DMEM |
血清 | 10% FBS |
温度 | 37 ℃ |
空气条件 | 5% CO2,95% AIR |
生长代数 | P4-5 |
冻存条件 | 培养基50%、血清40%、DMSO 10% |
五、组成:
组成 | 规格 |
细胞一瓶 | T25 |
细胞培养与操说明 | 1份 |
六、细胞接收后的操作流程与注意事项
1. 细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度,换液培养或传代。
2. 如果细胞为贴壁细胞,而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞及时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基,培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡,请及时联系实验室,技术人员会跟进解决。
3. 贴壁细胞生长缓慢:适当提高血清浓度(最高不超过20%),或可根据该细胞生长密度,考虑胰酶消化后,转移到新的培养瓶继续培养。
4. 生长不均:贴壁细胞若出现生长不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重新打散细胞,加入新鲜培养基进行培养。
七、细胞常规培养传代流程(请严格遵守无菌操作)
1. 吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2~3 ml 0.25% EDTA的胰酶消化(注意把握消化时间,通常控制在1~2min)。
2. 镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁运动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml 完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落、吹散。
3. 取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,于培养箱中培养。
4. 注意培养基PH值变化情况,定期换液,待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。
特别注意:(如使用公共实验室或初次接触细胞培养,建议添加双抗培养)
1. 收到细胞后请尽快更换为含10% FBS的新鲜培养基,不建议使用原瓶中运输用培养基。
2. 如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时拍照并联系实验室。
3. 细胞任何售后问题,均需拍照存档并及时联系客服。
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